Microscop

Microscopul este un instrument optic folosit pentru observarea obiectelor foarte mici, care nu pot fi vizibile cu ochiul liber. Din punct de vedere al structurii microscopul este format dintr-o parte mecanica si o parte optica.

Partea mecanica este formata dintr-un picior in forma de potcoava, pe care se sprijina o coloana. La aceasta sunt atasate o platina si un tub. Platina este prevazuta cu un orificiu central pentru trecerea luminii si are atasati doi cavaleri pentru fixarea preparatului. La microscoapele mai perfectionate, preparatul este fixat pe un car mobil, care se deplaseaza inainte-inapoi si lateral cu ajutorul a doua suruburi. Tubul contine partea optica propriu-zisa a microscopului si poate fi deplasat in sus si in jos, cu ajutorul a doua suruburi numite vize: macroviza pentru deplasari rapide si microviza pentru deplasari foarte mici.

Partea optica a microscopului este formata din sistemul de iluminare si partea optica propriu-zisa.

Sistemul de iluminare este compus dintr-o sursa de iluminare si un system care concentreaza razele luminoase in planul obiectivului. La microscoapele de constructie mai veche sursa de lumina (artificiala sau naturala) este independenta. Microscoapele moderne au o sursa de luminare artificiala, plasata in interiorul piciorului aparatului, lumina fiind indreptata asupra obiectivului cu ajutorul unei oglinzi. Intre sursa de lumina si obiectiv se interpune un condensator, format dintr-un sistem de lentile convergente cu rolul de a concentra fasciculul luminos asupra obiectului. Condensatorul este prevazut cu o diafragma iris, care asigura o centrare corecta a luminii si indepartarea razelor laterale, pentru obtinerea unei imagini clare. Pentru a mari contrastul imaginii intre oglinda si condensator se plaseaza un disc de sticla colorata. Condensatorul poate fi apropiat sau departat de platina cu ajutorul unui surub. Partea optica propriu-zisa a microscopului este formata din doua sisteme de lentile: obiectivul si ocularul.

Obiectivul microscopului este situat in partea inferioara a tubului, in apropierea obiectului de examinat si formeaza o imagine reala, marita si rasturnata. Microscoapele sunt prevazute cu mai multe obiective, cu putere de marire diferita. Ele sunt insurubate intr-un dispozitiv numit revolver, care prin rotire permite inlocuirea unui obiectiv cu altul. Obiectivele sunt de doua feluri: uscate si cu imersie. Cand se foloseste obiectivul cu imersie, intre obiectiv si preparat se pune ulei de cedru, glicerina, parafina, ulei de ricin etc.

Ocularul microscopului este format dintr-un system de lentile, plasat in partea superioara a tubului microscopului spre ochiul observatorului. Are rolul de a mari imaginea furnizata de obiectiv, pe care o transforma intr-o imagine virtuala. Microscoapele moderne sunt binoculare. Pe fiecare obiectiv si ocular sunt gravate cifrele, care indica puterea de marire a acestora. Puterea de marire a unui microscop rezulta din inmultirea cifrei de pe ocular cu cea inscrisa pe obiectiv.

A. Microscopia optica

1. Modul de folosire a microscopului optic

Microscopul optic (fotonic) utilizeaza spectrul luminii vizibile sau, in cazuri speciale, radiatiile ultraviolete. Cu ajutorul acestui microscop, obiectele pot fi examinate in stare nativa sau dup ace sunt fixate si colorate.

Preparatele native se pot face dintr-o cultura microbiana sau direct din produs. Ele sunt examinate intre lama si lamella sau in picatura suspendata. In primul caz se ia cu ansa sau cu o pipeta Pasteur o picatura din cultura lichida sau din cultura solida suspensionata in solutie salina fiziologica si se depune pe o lama curate si degresata, peste care se pune o lamela curate. In cel de al doilea caz se descompune picatura din suspensie pe o lamella care se acopera cu o lama cu godeu. Prin rasturnarea lor, picatura ramane suspendata pe lamela.

Pentru examinare se plaseaza preparatul nativ pe platina microscopului, se centreaza lumina, se inchide mult diafragma, se coboara condensatorul si se adduce in dreptul preparatului un obiectiv uscat, cu o putere de marire mare. Se apropie mult lentila frontala a obiectivului de preparat prin coborarea tubului optic, cu ajutorul macrovizei. Se ridica apoi treptat obiectivul, pana la aparitia elementelor din preparat in campul visual. Punerea la punct (reglarea fina) a marginii se face cu ajutorul vizei micrometrice. Dupa examinare preparatele trebuie puse intr-un cirstalizator cu amestec sulfocromic pentru sterilizare. Preparatele native pot fi examinate si pe fond intunecat, precum si prin procedeul contrastului de faza.

Preparatele colorate prezinta avantajul ca sunt sterilizate prin fixare, sunt usor de manipulate si examinat, si pot fi pastrate mult timp. Aceste preparate permit examinarea dupa afinitatea pentru anumite culori si pot evidentia unele elemente structurale (cili, capsula, spori, granulatii etc.) prin coloratii specifice.

Examinarea preparatelor colorate se face astfel: se centreaza lumina cu fata plana a oglinzii (la microscoapele cu sursa de lumina independenta), se ridica condensatorul pana sus, se lasa diafragma deschisa si dupa aducerea obiectivului cu imersie, in dreptul preparatului care a fost fixat pe platina microscopului, se pune o picatura de ulei de cedru pe frotiu. Uleiul de cedru, avand un indice de refractie apropiat de cel al sticlei, are rolul de a impiedica deformarea imaginii, care s-ar produce din cauza stratului de aer ce are un indice de refractie diferit si care s-ar interpune intre frotiu si obiectiv. Cu ajutorul macrovizei se coboara tubul optic si se introduce lentila frontala a imersiei in uleiul d ecedru pana la imediata apropiere a frotiului. Punerea la punct se face cu ajutorul vizei micrometrice, iar deplasarea lamei pentru schimbarea campurilor microscopice se face cu ajutorul carului mobil.

Dupa examinare se ridica obiectivul, se sterge uleiul de cedru de pe imersie si se scoate lama de pe platina microscopului. Urmele de cedru pot fi indepartate cu o carpa moale imnuiata in xilen.