HPLC în determinarea coloranților

Extras din referat Cum descarc?

Cromatografia de lichide de inalta performanta inlocuieste vechile metode cromatografice de analiza a colorantilor alimentari (cromatografia in strat subtire, cromatografia pe hartie) furnizand rezultate precise, reproductibile si rapide. 
1. Stabilirea naturii colorantului si extractia sa din proba de analizat 
Se aplica o metoda de testare calitativa a produselor alimentare pentru a putea determina natura colorantului introdus in procesul de fabricatie. Metoda permite stabilirea naturii colorantului folosit si anume: natural sau sintetic. 
Daca colorantul este sintetic, acesta este extras rapid din proba intr-un amestec apa-metanol 7/3. Se observa vizual o colorare intensa a amestecului de extractie, situatie care nu apare in cazul in care colorantul este natural. 
Daca in urma acestei testari calitative, se constata prezenta in proba a unui colorant sintetic, se trece la extractia acestuia in vederea dozarii lui cantitative. 
2. Determinarea colorantilor alimentari sintetici 
Este o metoda HPLC de determinare a unor coloranti alimentari sintetici, si anume: tartrazina, ponceau 4 R, allura red si galben de chinolina . 
Se incerca mai intai separarea colorantilor sintetici mentionati utilizand o coloana cromatografica Pecosphere C18, 5 um, 150 x 4,6 mm (BrownLee), o faza mobila constituita dintr-un amestec acetat de amoniu:metanol (7:3, v/v) si un debit al fazei mobile de 0,7 mL/min. Detectia colorantilor alimentari sintetici separati se efectueaza spectrofotometric, cu ajutorul detectorului diode array al sistemului HPLC. 
Colorantii ponceau 4 R si galbenul de chinolina au timpii de retentie foarte apropiati si nu se separa. Cu toate ca cei doi coloranti nu se pot separa cromatografic, ei pot fi totusi determinati prin efectuarea de masuratori de absorbanta la lungimea de unda de 507 nm pentru determinarea ponceau 4 R (galbenul de chinolina nu absoarbe la aceasta lungime de unda) si la 413 nm pentru galben de chinolina. De asemenea, in cazul analizei unor probe reale, in vederea identificarii compusului separat, este recomandata compararea spectrelor de absorbtie ale compusilor separati (cu timpii de retentie in jurul valorii de 3 min) cu spectrul fiecaruia din cei doi coloranti (ponceau 4 R si galben de chinolina). 
Se foloseste o coloana cromatografica cu aceleasi caracteristici generale, dar produsa de alta firma (Supelco),si se obtin picuri cromatografice bine separate pentru colorantii alimentari sintetici 
ponceau 4 R si galben de chinolina. Parametrii metodei cromatografice utilizate sunt prezentati in tabelul urmator:
coloana Coloana cu faza inversa supelcosil C 18 5um,
150x4.6 mm
faza mobila Acetat de amoniu 0.1M: metanol : 7:3 (v/v)
Debit 0.7 ml/min
Temperatura coloanei 37?C
detector UV Vis tip Diode Array
Volum de injectie 10ul
In figurile 1 si 2 sunt prezentate cromatogramele ce se obtin pentru tartrazina si galbenul de chinolina folosind cea de a doua coloana cromatografica (Supelcosil), precum si spectrele de absorbtie corespunzatoare acestora, spectre trasate cu detectorul diode array al aparatului HPLC. 
Spre deosebire de cromatogramele obtinute pentru ponceau 4R, allura red si tartrazina, in care s-a obtinut cate un pic cromatografic bine definit corespunzator fiecaruia din colorantii mentionati, pentru colorantul galben de chinolina cromatograma este constituita din cinci picuri cromatografice. 
Colorantul sintetic galben de chinolina se prezinta sub forma unui amestec de saruri de sodiu ale unor acizi di si trisulfonici. Numarul si pozitia gruparilor sulfonice pe nucleul benzenic, explica comportamentul cromatografic diferit al componentelorgalbenului de chinolina. 
Figura 1. Cromatograma pentru colorantul tartrazina si spectrul de 
absorbtie corespunzator acestuia 
Daca se compara alura spectrelor de absorbtie corespunzatoare picurilor cromatografice ce se obtin la separarea componentelor galbenului de chinolina (figura 1), se observa ca forma acestora este asemanatoare. Acest lucru se poate explica prin faptul ca este prezenta aceeasi grupare cromofora in toate componentele amestecului, dar numarul si pozitia gruparilor sulfonice din molecula acestora determina un comportament cromatografic diferit pentru fiecare component. 
In figura 3 este prezentata cromatograma ce se obtine pentru amestecul format din cei patru coloranti alimentari sintetici analizati: ponceau 4R, allura red, tartrazina, galben de chinolina. Studiind cromatograma prezentata in figura 3 se observa ca se obtin picuri cromatografice bine definite pentru tartrazina, ponceau 4R si allura red.

Fisiere in arhiva (1):

 HPLC in Determinarea Colorantilor.doc