Tehnologia ADN Recombinat

Aceste endonucleaze :

- recunosc in molecula de ADN o secventa anumita de baze ;

- cliveaza cate o legatura fosfat diesterica de pe ambele catene intr-un loc particular al secventei recunoscute ;

- se gasesc intr-un numar mare de specii bacteriene.

Werner Arber a descoperit ca functia biologica a endonucleazelor de restrictie este de a recunoaste si de a scinda un ADN strain (de exemplu ADN al unui virus infectant) ; acest ADN se spune ca este "restrans".

ADN propriu al celulei nu este clivat in mod obisnuit pentru ca secventa recunoscuta de endonucleaza de restrictie este metilata de o enzima, ADN metilaza specifica, fiind astfel protejata.

Exista trei tipuri de endonucleaze notat cu cifrele romane I, II si III.

Endonucleazele de restrictie de tip I si III sunt :

- in general complexe mari , cu mai multe subunitati continand ambele activitati: de endonucleaza si de metilaza ;

- amandoua tipurile se deplaseaza de-a lungul ADN printr-o reactie care necesita energie din molecule de ATP.

Endonucleazele de restrictie de tipul II :

- sunt mai simple , nu au nevoie de ATP ;

- utilitatea extraordinara a enzimelor de restrictie de tip II a fost evidentiata de Daniel Nathans.

Endonucleazele de restrictie permit realizarea unei scindarii exacte in locuri bine definite ale moleculelor de ADN bicatenare ; sunt adevarate "bisturie moleculare".Ele sunt instrumentele indispensabile pentru excizarea fragmentelor de ADN (gene) din diferite molecule de ADN : viral , bacterian , din celule eucariote.

In diferite specii bacteriene sunt peste 800 de endonucleaze de restrictie.Peste 100 de secvente specifice diferite sunt recunoscute de una sau mai multe enzime.

Numele fiecarei enzime este constituit din abrevierea a trei litere din denumirea speciei bacteriene de la care deriva (ex: Bam de la Bacillus amyloliquefaciens; Eco de la Escherichia Coli)